Levantamento sorológico de brucelose em bovinos monitorados no estado da Bahia / Serological survey of brucellosis in cattle monitored in the estate of Bahia

A brucelose é uma doença bacteriana de grande importância para a economia pecuária e para a saúde pública por se tratar de uma zoonose. É uma doença infecto-contagiosa que tem com agente etiológico bactérias do gênero Brucella. Em bovinos, as espécies do gênero é a Brucella abortus, que são cocobacilos gram negativo, intracelulares facultativos, imóveis e não esporulado. A infecção apresenta evolução crônica e acomete animais de todas as idades, sendo mais frequente em indivíduos sexualmente maduros. O objetivo desse trabalho é investigar, por meio da sorologia para brucelose bovina, utilizando a técnica do ELISA indireto, amostras de animais reagentes abatidos em frigoríficos inspecionados no estado da Bahia. Foram utilizados 666 animais, selecionados aleatoriamente no momento do abate. O sangue foi coletado com finalidade de obtenção de soro, todas as amostras foram submetidas à prova de triagem do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT), prova do 2mercaptoetanol (2-ME) e ELISA Indireto. Das amostras reagentes no teste do AAT, obteve-se uma prevalência estimada em 1,2%. A prevalência no teste do ELISA foi de 13,21% (n=86). Esse resultado sugere a ocorrência de falsos negativos quando se utiliza a prova do antígeno acidificado tamponado.

Brucellosis is a bacterial disease of great importance to the livestock economy and to public health because it is a zoonosis. It is an infectious disease that has etiologic agent with bacteria of the genus Brucella. In cattle, the species of the genus Brucella is Brucella abortus that are gram negative, facultative intracellular, real estate and not sporulated. The infection presents chronic and affects animals of all ages, being more frequent in sexually mature individuals. This study aimed to investigate through serology for brucellosis, using the technique of indirect ELISA, samples from positive animals slaughtered in slaughterhouses inspected in the state of Bahia. A total of 666 animals were used, randomly selected at the time of slaughter. Blood was collected in order to obtain serum, all samples were subjected to a screening test Antigen Buffered Acidified (AAT), proof of 2-mercaptoethanol (2-ME) and Indirect ELISA. Of reagents in the test samples of AAT obtained an estimated prevalence of 1.2%. The prevalence in the ELISA test was 13.21% (n = 86). This result suggests the occurrence of false negatives when using the buffered acidified antigen test.

Inquérito sorológico de brucelose em machos e fêmeas bovinas em fazendas do Estado de Mato Grosso do Sul / Serological survey of brucellosis in males and females of cattle in the State of Mato Grosso do Sul

Objetivou-se avaliar a ocorrência de animais soro reagentes à brucelose bovina em fazendas localizadas no Estado de Mato Grosso do Sul, por meio de exame sorológico utilizando o Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) e discutir as possíveis diferenças entre as soroprevalências de fêmeas e machos. Foram avaliados, a partir do teste de triagem com Antígeno Acidificado Tamponado (AAT), 724 bovinos da raça Nelore, sendo 274 machos e 450 fêmeas, provenientes de oito propriedades com histórico de problemas reprodutivos. O teste foi procedido conforme o protocolo determinado pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA). Os resultados demonstraram baixa soroprevalência da doença nos bovinos testados, sendo detectada prevalência para a doença de 1,10% nos machos e 2,88% nas fêmeas.Quando se considera o touro isoladamente nos rebanhos, pode-se perceber que a fertilidade é muito mais importante nos machos do que nas fêmeas individualmente, uma vez que os touros podem se acasalar com um número muito maior de fêmeas, seja na monta natural ou na inseminação artificial, demonstrando a importância do inquérito epidemiológico na população geral, principalmente nos machos. A maior frequência da doença foi encontrada nas fêmeas podendo estar relacionada à infecção por Brucella spp. no ambiente decorrente de parto ou aborto tornando as fêmeas transmissoras permanentes da doença.

The objective of this study was to evaluate the occurrence of seroreactive animals to bovine brucellosis in farms located in the State of Mato Grosso do Sul, by means of a serological examination using the Acidified Buffered Antigen (AAT) and to discuss the possible differences between the seroprevalence of females and males. A total of 724 Nellore cattle, 274 males and 450 females, from eight farms with a history of reproductive problems, were evaluated using the screening test with Acidified Buffered Antigen (AAT). The test was carried out according to the protocol determined by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA).The results showed a low seroprevalence of the disease in the tested cattle, with a prevalence of 1.10% in males and 2.88% in females.When considered the bull alone in herds, it can be shown that fertility is much more important in males than in females individually, since bulls can mate with a much larger number of females, either in natural mating or in artificial insemination, demonstrating the importance of epidemiological survey in the general population, especially in males. The highest frequency of the disease was found in females and may be related to infection by Brucella spp. in the environment from childbirth or abortion making females permanent transmitters of the disease.

Avaliação das técnicas de imunodifusão em gel de ágar, ensaio imunoenzimático indireto e reação em cadeia da polimerase no diagnóstico da brucelose ovina / Evaluation of technical, immunodiffusion agar gel, enzyme-linked immunosorbent assay and polymerase chain reaction in the diagnosis of ovine brucellosis

A brucelose na espécie ovina tem recebido destaque, uma vez que se trata de uma enfermidade que acomete o sistema reprodutivo dos animais, provocando sério comprometimento no setor produtivo. Dessa forma, objetivou-se a avaliação de três métodos para o diagnóstico da brucelose ovina: o ensaio imunoenzimático indireto (ELISAi), a técnica imunodifusão em gel de ágar (IDGA) e a reação em cadeia da polimerase (PCR). Para tanto, utilizaram-se 211 amostras de sangue de ovinos oriundos de propriedades de nove municípios da microrregião homogênea de Teresina, Piauí. As 211 amostras de sangue foram submetidas aos testes sorológicos e à PCR, visando detectar anticorpos anti-B. ovis e DNA de Brucella ovis, respectivamente. Foram obtidos resultados positivos nos testes sorológicos, sendo 36 (17,06%) positivos no teste IDGA e sete (3,31%) positivos no teste ELISAi, contudo não houve resultados positivos na técnica de PCR. Dos métodos de diagnóstico utilizados neste estudo, o teste IDGA foi o que apresentou melhor desempenho na detecção de animais reagentes, quando comparado ao teste ELISAi e à PCR em amostras de sangue, e o percentual de animais soropositivos sugere uma ampla distribuição de ovinos infectados por Brucella ovis na região em estudo, o que pode causar prejuízos aos produtores.(AU)

Brucellosis in sheep has received a major focus, since it is a disease that affects the reproductive system of animals, causing serious impairment in the productive sector. Thus, three methods for the diagnosis of ovine brucellosis were evaluated as goal, the indirect Linked Immunosorbent Assay (ELISAi) test, the Immunodiffusion Agar Gel (AGID) technique and the Polymerase Chain Reaction (PCR). Therefore, we used 211 sheep blood samples from properties of nine municipalities of the homogeneous micro-region of Teresina, Piaui. The 211 blood samples were subjected to serologic testing and PCR to detect anti-B. ovis antibodies, and Brucella ovis DNA, respectively. Positive results in serological tests were obtained, 36 (17%) positive in the AGID test and seven (3.3%) positive to the ELISAi test, however, there were no positive results in the PCR technique. Of the diagnostic methods used in this study, the AGID test was the one that presented the best performance in the detection of reactive animals, when compared to ELISAi and PCR in blood samples and, the percentage of seropositive animals suggests a wide distribution of Brucella ovis infected sheep in the study region and could cause loss to producers.(AU)

Detecção de Brucella abortus em tecidos bovinos utilizando ensaios de PCR e qPCR / Detection of Brucella abortus in bovine tissue using PCR and qPCR

Objetivou-se no presente estudo avaliar as técnicas reação em cadeia da polimerase (PCR) e PCR em Tempo Real (qPCR) para detectar Brucella abortus, a partir de tecidos bovinos com lesões sugestivas de brucelose. Para isto, 21 fragmentos de tecidos bovinos coletados em abatedouros de Mato Grosso do Sul foram processados e submetidos ao cultivo microbiológico e extração do DNA genômico para realização das reações de PCR e qPCR. No cultivo microbiológico, oito amostras apresentaram crescimento bacteriano e cinco foram confirmadas como B. abortus por PCR. Diretamente das amostras de tecido, DNA do gênero Brucella (oligonucleotídeos IS711) foi detectado em 13 (61,9 por cento) amostras de tecido e 17 (81 por cento) amostras de homogeneizado. Já com os oligonucleotídeos espécie-específicos BruAb2_0168F e BruAb2_0168R, 14 (66 por cento) amostras de tecido e 18 (85,7 por cento) amostras de homogeneizado foram amplificadas. Seis amostras positivas na PCR espécie-específica foram sequenciadas e o best hit na análise BLASTn foi B. abortus. Na qPCR, 21 (100 por cento) amostras de tecidos e 19 (90,5 por cento) amostras de homogeneizado foram positivas para B. abortus. Dez amostras de DNA de sangue bovino de rebanho certificado livre foram utilizadas como controle negativo nas análises de PCR e qPCR utilizando-se os oligonucleotídeos BruAb2_0168F e BruAb2_0168R. Na PCR nenhuma amostra amplificou, enquanto que na qPCR 2 (20 por cento) amplificaram. Conclui-se que as duas técnicas detectam a presença de B. abortus diretamente de tecidos e homogeneizados, porém a qPCR apresentou maior sensibilidade. Os resultados obtidos indicam que a qPCR pode representar uma alternativa rápida e precisa para a detecção de B. abortus diretamente de tecidos, e ser utilizada em programas de vigilância sanitária, por apresentar sensibilidade e especificidade satisfatórias.

The aim of the study was to evaluate the technical polymerase chain reaction (PCR) and Real-Time PCR (qPCR) to detect Brucella abortus from bovine tissues with suggestive lesions of brucellosis. For this, 21 fragments of bovine tissues collected at abattoirs of Mato Grosso do Sul were processed and subjected to microbiological culture and extraction of genomic DNA to perform the PCR reactions and qPCR. Eight samples of microbiological culture showed bacterial growth and five samples were confirmed as B. abortus by PCR. DNA of Brucella (IS711 primers) was detected in 13 (61.9 percent) directly from tissue samples and 17 (81 percent) from tissue homogenate samples. With the species-specific set of primers BruAb2_0168F and BruAb2_0168R, 14 (66 percent) tissue samples and 18 (85.7 percent) tissue homogenate samples were positive. Six positive samples in the species-specific PCR were sequenced and the best hit in the BLASTn analysis was B. abortus. By qPCR, 21 (100 percent) tissue samples and 19 (90.5 percent) tissue homogenate samples were positive for B. abortus. Ten samples of DNA from bovine blood from an accredited-free herd were used as negative control in PCR and qPCR analysis using the primers BruAb2_0168F and BruAb2_0168R, and no one amplified by PCR, whereas two samples were amplified by qPCR (20 percent). In conclusion, both techniques detect the presence of B. abortus directly from tissues and homogenized, but the qPCR showed high sensitivity. The results indicate that qPCR can represent an alternative tool for faster and more accurate detection of B. abortus directly from tissues, and use in health surveillance programs by presenting satisfactory sensitivity and specificity.

Confirmação de infecção por Brucella abortus em um rebanho bovino certificado livre em Minas Gerais: relato de caso / Brucella abortus infection in an officially brucellosis-free bovine herd in Minas Gerais state - Brazil: a case report

Relata-se a ocorrência de um surto de brucelose em um rebanho de aproximadamente 1000 animais, livre da doença há 18 anos, certificado pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento desde 2006. Dois animais reagiram aos testes sorológicos de diagnóstico por ocasião dos procedimentos de recertificação em 2008. Após o sacrifício deles, Brucella abortus, biovariedade 1, amostra não vacinal, foi isolada e identificada por meio de provas bioquímicas e de biologia molecular (PCR AMOS). A origem do agente no rebanho é de difícil determinação. No entanto, a adoção de procedimentos preconizados pelo Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose permitiu evitar a disseminação da enfermidade. Ocorrências como essas, em que rebanhos livres foram infectados após anos sem a ocorrência de brucelose, nunca haviam sido relatadas no Brasil.

A Brucellosis outbreak is reported in a bovine herd free from the disease for over 18 years, officially free since 2006. One heifer and one cow tested positive in serological tests for the 2008 annual recertification in a herd of almost 1000 animals. Isolation and identification by biochemical tests and molecular biology (AMOS PCR) confirmed the infection by a Brucella abortus biovar 1 field strain. It wasn't possible to find the source of the infection. However, adoption of standard procedures prescribed by the Brazilian National Brucellosis and Tuberculosis Control and Eradication Program hindered the spread of the disease. This is the first report of a Brucella infection in an officially Brucellosis-free bovine herd in Brazil.

Intercorrência entre leucose enzoótica e brucelose em búfalos (Bubalus bubalis) em sistema de produção extensivo / Intercurrence of enzootic leucosis and brucellosis in buffaloes (Bubalus bubalis) in extensive production system

Objetivou-se com este estudo avaliar a intercorrência entre leucose enzoótica e brucelose em búfalos (Bubalus bubalis) em sistema de produção extensivo, pelo estabelecimento da prevalência de bubalinos reagentes às provas diagnósticas específicas. Foram analisados sorologicamente 232 animais, pela técnica de imunodifusão dupla em gel de agarose para diagnóstico de leucose enzoótica e o teste do antígeno acidificado tamponado, seguida pelos testes confirmatórios 2-mercaptoetanol e soroaglutinação lenta em tubos para diagnóstico de brucelose. As prevalências de búfalos que apresentaram positividade para leucose e brucelose foram 4,21% (10/232) e 5,18% (12/232), respectivamente. Os resultados obtidos nesta pesquisa permitiram concluir que as infecções estudadas encontram-se presentes na população avaliada, entretanto, com baixa prevalência e sem dependência de ocorrência entre ambas.

This study was carried out to evaluate the intercurrence of brucellosis and enzootic leucosis in buffaloes in extensive production system by establishing the prevalence of reagent buffaloes for specific diagnostic tests. We analyzed 232 animals serologically by the technique of double immunodiffusion in agarose gel (AGID) for diagnostic of leucosis and the tampon acidified antigen (TAA) test, followed by confirmatory tests of 2-mercaptoethanol (2-ME) and slow serum agglutination (SSA) in tubes for diagnostic of brucellosis. The prevalence of buffaloes that were positive for leucosis and brucellosis tests were 4.21% (10/232) and 5.18%(12/232) respectively. The results of this investigation indicated that the diseases occur in the population studied, however, with low prevalence and without depending on the occurrence of both.

Avaliação de testes sorológicos de triagem para diagnóstico da brucelose bubalina / Evaluation of screening serological tests for brucellosis diagnosis in buffaloes

The study compared the performance of three screening serological tests: buffered plate antigen (BPA), Rose-Bengal produced with 1119-3 Brucella abortus strain (RB1119-3), and Rose-Bengal produced with 99 Brucella abortus strain (RB99). Sera from 696 adult female animals were submitted to BPA, RB1119-3, RB99, 2-mercaptoethanol test (ME), and complement fixation test (FC). The gold standard was the combination of CF and ME. The Kappa values for BPA, RB99, and RB1119-3 were 0.82, 0.74, and 0.70, respectively. The relative sensitivity and specificity for the same tests were 0.98 and 0.96, 0.92 and 0.94, and 0.95 and 0.92, respectively. These results indicate that BPA is a better screening test than RB for buffalo, regardless of the B. abortus strain in RB.

Estudo comparativo entre os testes adotados pelo PNCEBT para o diagnóstico sorológico da brucelose em bovinos / Comparative study of serological tests for bovine brucellosis diagnosis adopted by the Brazilian Program for animal brucellosis and tuberculosis control and eradication

Avaliaram-se comparativamente as provas do antígeno acidificado tamponado (AAT), a combinação das provas de soroaglutinação lenta e 2-mercaptoetanol (2-ME) e a reação de fixação de complemento (RFC), provas preconizadas pelo Programa Nacional de Controle e Erradicação de Brucelose Tuberculose (PNCEBT). Para tanto, foram alisadas 1.061 amostras de soros bovinos. Os dados foram analisados pelo indicador kappa, adotando-se como ponto de corte o título 25 no 2-ME e 4 na RFC. Constatou-se sensibilidade relativa de 99,6%, 98,8% e 91,1%, respectivamente, para o AAT, a 2-ME e a RFC, e especificidade relativa de 83,9%, 96,2% e 100,0%. A comparação entre os testes adotados pelo programa apontou concordância boa entre o teste de triagem (AAT) e os testes confirmatórios (kappa: 2-ME = 0,80; e RFC = 0,73) e concordância ótima quando os testes confirmatórios foram comparados entre si (kappa = 0,86). No entanto foram encontrados soros com título elevado em um dos testes confirmatórios e resultado negativo no outro, o que reforça a ideia de que o diagnóstico sorológico da brucelose é mais confiável quando obtido por meio dos resultados de vários testes.

Serum samples from 1,061 bovine were analyzed by serological diagnostic techniques adopted by the Brazilian Program for Animal Brucellosis and Tuberculosis Control and Eradication in order to compare, as a screening test, the rose Bengal plate test (RBPT), and as confirmatory tests, the 2-mercaptoethanol plus standard tube agglutination test (2-ME), and the complement fixation test (CFT). Relative sensitivity of 99.6%, 98.8% and 91.1% were observed, respectively, for RBPT, 2-ME and CFT, and relative specificity of 83.9%, 96.2% and 100.0%. The agreement between tests was analyzed by the kappa statistic (2-ME cut-off = titer 25, and CFT cutoff = titer 4). RBPT showed a substantial agreement (kappa: 2-ME = 0.80; and RFC = 0.73) with the confirmatory tests, and excellent agreement between the confirmatory tests (kappa = 0.86) was observed. However sera with a negative result in one of the confirmatory tests and a high titer in the other were observed, reinforcing that the serological diagnosis of bovine brucellosis is more reliable when based on the results of several tests.

Alterações microscópicas em linfonodos de bovinos sorologicamente positivos para brucelose / Microscopic changes in cattle lymph odes serologically positive for brucellosis / Cambios microscópicos en ganglios linfáticos de bovinos serológicamente positivos para brucelosis

A Brucelose é uma doença infecto-contagiosa provocada por bactérias intracelulares facultativas do gênero Brucella spp., zoonose de distribuição mundial. As principais manifestações clínicas da doença provocam redução na produção dos animais, e suas implicações econômicas causam barreiras na comercialização. Objetivou-se pesquisar alterações microscópicas nos linfonodos de bovinos sorologicamente positivos para brucelose, relacionando à reação inflamatória ganglionar como achado indicativo para o diagnóstico histopatológico da doença. Foram colhidas amostras de linfonodos cervicais superiores em vinte bovinos fêmeas, 10 da raça Gir e 10 da raça Nelore, enviadas ao Laboratório de Patologia Animal da Universidade de Uberaba. Ao realizar o exame macroscópico dos linfonodos, verificou-se que todos se apresentavam reacionais, mesmo que discretamente. Na leitura das lâminas histopatológicas, diagnosticou-se em 100% deles linfadenite crônica, compatível com o quadro de brucelose. O impacto econômico e zoonótico da doença justificam a necessidade definitiva do estabelecimento de programas de controle e erradicação, sendo que o diagnóstico representa grande relevância neste processo, e o exame histopatológico perfaz importante auxílio na confirmação do diagnóstico sorológico.

Brucellosis is an infectious and contagious disease caused by intracellular bacteria of the genus Brucella spp., zoonosis of worldwide distribution. The main clinical manifestations of this disease cause reduction in the animals’ production, and their economic implications provoke barriers in trade. The aim of this study is to find microscopic changes in cattle lymph nodes from animals serologically positive for brucellosis, associating the inflammatory reaction nodes as indicative findings for the histopathologic diagnosis of the disease. Samples were collected from upper cervical lymph nodes in twenty cows, ten from Gir breed, and ten, Nellore, sent to Laboratory of Animal Pathology at the University of Uberaba. In macroscopic examination of the lymph nodes, it was found that all had been reactive even if discretely. In reading the histopathological slides, it was diagnosed in 100% of cases, the same chronic lymphadenitis, compatible with the framework of brucellosis. The economic impact and the zoonotic characteristic of the disease justify the definitive need to establish programs of control and eradication, as the diagnosis is very relevant in this process, histopathological examination turns an important aid to confirm serological diagnosis.

La brucelosis es una enfermedad infectocontagiosa causada por bacterias intracelulares facultativas del género Brucella spp, zoonosis de distribución mundial. Las principales manifestaciones clínicas de la enfermedad provocan reducción en la producción de los animales, y sus implicaciones económicas causan obstáculos en la comercialización. En esta investigación se buscó encontrar cambios microscópicos en los ganglios linfáticos de ganados sorológicamente positivos para brucelosis, listando la reacción inflamatoria de los ganglios linfáticos como indicativo para el diagnóstico histopatológico de la enfermedad. Las muestras fueron recolectadas en los ganglios linfáticos superiores del cuello de veinte vacas, diez de la raza Gir, y diez de la raza Nelore, y enviadas al Laboratorio de Patología Animal de la Universidad de Uberaba. Al realizar el examen macroscópico de los ganglios linfáticos, se comprobó que todos se presentaban reactivos, aunque discretamente. En la lectura de las diapositivas histopatológicas, se diagnosticó en 100% de ellos linfadenitis crónica, compatible con el cuadro de brucelosis. El impacto económico y zoonótico de la enfermedad justifican la necesidad definitiva de establecer programas de control y erradicación, siendo que el diagnóstico representa gran relevancia en este proceso, y el examen histopatológico se convierte en importante ayuda en la confirmación del diagnóstico serológico.

Monitoreo epidemiológico para Brucella abortus en fincas doble propósito del Municipio Machiques de Perijá, Venezuela: parte II validez y seguridad de las pruebas anillo de la leche y rosa de bengala / Epidemiologic surveillance system for Brucella abortus in dual purpose farms from Machiques de Perijá county, Venezuela: part II validity and accuracy of ring test and rose bengal test

Se evalúa la capacidad operativa de las pruebas diagnósticas: anillo de la leche (PAL), inmunoensayo enzimático indirecto (ELISA-i), rosa de bengala (RB) y ELISA competitivo (ELISA-c), utilizadas tras 5 años (2003-2007) de vigilancia epidemiológica para brucelosis bovina (Brucella abortus) en el municipio Machiques de Perijá, partiendo de la revalorización de un conjunto de muestras de leche y suero probados positivos y negativos. La garantía de diagnóstico previamente positivo fue alcanzada a través de evidencias epidemiológicas y positividad comprobada en suero sanguíneo al ensayo con antígeno buferado en placa y confirmación mediante fluorescencia polarizada (FP); sólo se consideraron negativos probados, los sueros y leches globales provenientes de animales negativos a FP que a lo largo del estudio no presentaron antecedentes serológicos alguno. Los resultados en leche muestran superioridad de ELISA-i versus PAL, en sensibilidad, 98,55 contra 56,52 por ciento; especificidad 99,41 y 98,82 por ciento; predicción positiva 98,58 y 95,12 por ciento; predicción negativa 99,49 y 84,84 por ciento; y cocientes de probabilidad. El nivel de concordancia entre los resultados y el verdadero estatus de las muestras fue también preferente para ELISA-i, 97,8 contra 55,3 por ciento. Las evidencias sobre sueros probados dejan en duda la contribución de RB en el diagnóstico, control y erradicación de la enfermedad en el área de estudio, al demostrarse valores medios de validez (169,92 versus 197,21) y seguridad (171,74 versus 197,02), además de bajos coeficientes de verosimilitud entre sus resultados. ELISA-c, en cambio, mantuvo excelente capacidad diagnóstica.

The performance of the following diagnostic tests: Milk Ring Test (MRT), Indirect Enzyme-linked Immunosorbent Assay (iELISA), Rose Bengal Test (RBT) and Competitive ELISA (cELISA) used for 5 years (2003-2007) in the epidemiological surveillance system for bovine brucellosis (Brucella abortus) in Machiques de Perijá County was evaluated. For this purpose, milk and sera samples previously assessed through the abovementioned tests were reassessed to define their true condition (true positive or true negative). Samples were considered as true positive through epidemiological findings and a positive result in Buffered Plate Antigen Test, which was confirmed through Fluorescence Polarization Assay (FPA); samples were considered as true negative only when they were taken from FPA-negative animals that did not seroconvert during the study. Results from tests in milk showed a higher performance of iELISA versus MRT, in sensibility: 98.55 and 56.52 percent; in specificity: 99.41 and 98.82 percent; in positive predictive value: 98.58 and 95.12 percent; in negative predictive value: 99.49 and 84.84 percent; and in coefficients of probability, respectively. The level of agreement between test and true status of samples was higher in iELISA: 97.8 versus 55.3 percent. Results from true positive and true negative samples warrant a reappreciation of the contribution of RBT in diagnostics, control and eradication of brucellosis in the studied area, taking into account its medium values of validity (169.92 versus 197.21) and accuracy (171.74 versus 197.02), as well as its low coefficients of probability. By contrast, cELISA showed an excellent diagnostic performance.

Brucelosis en el zorro gris pampeano (Pseudalopex gymnocercus) en la provincia de La Pampa (Argentina) / Brucelosis in the grey fox of the pampas (Pseudalopex gymnocercus) in La Pampa province (Argentina)

Brucella abortus (Br abortus) es una de las principales causas de abortos y pérdidas reproductivas en el ganado bovino. Los fetos abortados y sus fluidos fetales son la mayor fuente de infección. Es así como la enfermedad puede llegar a animales silvestres cuando ingieren esos tejidos. El objetivo de este trabajo fue determinar la prevalencia serológica de brucelosis en el zorro gris pampeano (Pseudalopex gymnocercus). Se tomaron muestras de sangre de 41 zorros de la región centro-este de la provincia de La Pampa, Argentina. Para determinar la presencia de anticuerpos específicos contra Br abortus se utilizaron las Pruebas de Polarización de la Fluorescencia (FPA), Seroaglutinación en Microplaca (SAP) y Seroaglutinación en Microplaca con 2-mercaptoetanol (2-ME). Sobre un total de 41 sueros procesados por FPA, en 7 (17,1%) se detectaron anticuerpos contra Br abortus. Sólo 34 sueros fueron analizados por las pruebas de SAP y 2-ME, encontrando 5 (14,7%) y 4 (11,8%) muestras positivas, respectivamente. Los resultados permiten inferir que el zorro gris pampeano es susceptible a infectarse con Br. abortus a una tasa de incidencia importante. Es necesario realizar futuros estudios para establecer el rol del zorro en la transmisión de la enfermedad y sus consecuencias en esta especie.

Brucellosis is produced by several species of Brucella. Brucella abortus causes abortion and reproductive loss in bovine cattle. In the epidemiology of brucellosis, aborted fetus and their fetal fluids are the main source of infection and dissemination. Although the biological cycle and the disease consequences to domestic cattle have been widely studied, it is not the case with wild fauna. The objective of this study was to determine the serologic prevalence to brucellosis in the grey fox of the pampas (Pseudalopex gymnocercus). To that purpose, 41 foxes were sampled in the centre-east area of La Pampa province (Argentina). Blood samples for serologic studies were collected. A test of agglutination in microplate (SAP), another SAP with the addition of 2-mercapto-etanol (2-ME) and a test of polarization of the fluorescence (FPA) were used for the diagnosis of antibodies against Brucella abortus. For this, 17.1%, 14.7% and 11.8% was the prevalence found by FPA, SAP and SAP with 2-ME. More studies will be necessary to know the role of foxes in disease transmission and maintenance as well as the consequence of the diseases in foxes.

Avaliação do teste do anel em leite na vigilância epidemiológica da brucelose bovina em rebanhos e em laticínios / Evaluation of the ring test in an epidemiological surveillance of bovine brucellosis in herds and dairies

Analisaram-se 464 amostras individuais de leite e 54 amostras de leite de latões, oriundos de leite dos mesmos animais, por meio do teste do anel do leite (TAL) visando à sua aplicação no diagnóstico individual e de rebanhos da brucelose bovina. Foram também avaliadas 464 amostras de soro sangüíneo por meio de provas do antígeno tamponado acidificado (ATA), soroaglutinação lenta em tubos (SAL) e 2-mercaptoetanol (2-ME), todas para brucelose. Cento e vinte e três amostras (26,5 por cento) testadas pelo TAL apresentaram resultados positivos. Dessas, 30 resultaram positivas ao ATA, 28 ao ATA, à SAL e ao 2-ME e 18 à SAL. Das amostras positivas ao TAL, 95 pertenciam a animais sorologicamente negativos ao 2-ME, caracterizando 77,2 por cento (95/123) das reações falso-positivas; dos resultados negativos ao TAL, 4 pertenciam a animais sorologicamente positivos, caracterizando 1,2 por cento (4/341) de reações falso-negativas no TAL individual. Das 54 amostras de leite de latões analisadas pelo TAL, 17 foram consideradas positivas, das quais uma foi caracterizada como falso-positivo, pois todos os animais que a compunham foram negativos ao 2-ME. De 37 latões considerados negativos ao TAL, três continham leite de animais positivos ao 2-ME, caracterizando 8,1 por cento de falso-negativos. O TAL individual demonstrou elevado percentual de resultados falso-positivos, enquanto o TAL em amostras de leite obtidas em latões detectou 84,2 por cento de latões contaminados e 75 por cento de rebanhos infectados.

The ring test (RT) was analyzed regarding its application for the individual and herd bovine brucellosis diagnoses. Individual samples of milk from 464 cows and 54 composite samples of milk bucket from these animals were evaluated. The results were analyzed considering the serological results obtained by the rose bengal (RBT), tube agglutination (TAT) and 2-mercaptoethanol (2-ME) tests. From the 464 individual milk samples analyzed by the RT, 123 (26.5 percent) presented positive results. From those, 30 were positive only to the RBT, 28 by the RBT/TAT/2-ME and 18 by the TAT. From the 123 positive samples by the RT, 95 came from the 2-ME seronegative animals, characterizing 77.2 percent of false-positive reactions and 4/341 negative reactions came from the seropositive animals, characterizing 1.2 percent of false-negative reactions in the individual RT. From the 54 samples of compositive milk analyzed by the RT, 17 were positive. From these positive samples, one was considered false positive since all the animals that composed it were negative by the 2-ME. Three of the composite milk samples that were negative to RT(3/37) were constituted by milk from positive animals, characterizing 8.1 percent of false-negative results by the RT. The individual RT showed high percentage of false-positive results, while the RT in samples from bucket detected 84.2 percent of the contaminated milk and 75 percent of the infected herds.

Estabilidade do antígeno de célula total de Brucella abortus para uso no diagnóstico sorológico da brucelose bovina pela reação de fixação de complemento / Stability of Brucella abortus whole cell antigen for use in the serological diagnosis of bovine brucellosis by the complement fixation test

A reação de fixação de complemento é um dos testes usados no diagnóstico confirmatório da brucelose bovina, e para sua realização emprega-se o mesmo antígeno usado na prova de soroaglutinação lenta, porém não foi possível encontrar na literatura estudos sobre a estabilidade desse antígeno para uso na prova de fixação de complemento, de modo a estabelecer um prazo de validade para o mesmo. Por isso, esta investigação teve por objetivo avaliar a estabilidade do antígeno de célula total de Brucella conservado sob refrigeração, para uso na reação de fixação de complemento. Analisaram-se 14 partidas de antígeno, preparado com Brucella abortus amostra 1119/3 e padronizado para uso na prova de soroaglutinação lenta, com tempo de fabricação variando de 9 meses a 23 anos e 11 meses. Testaram-se 167 soros bovinos com títulos variáveis de anticorpos contra Brucella, adotando-se a técnica com incubação a 37ºC nas duas fases da reação e 5 unidades hemolíticas 50 por cento de complemento. Considerou-se como positivo o soro com pelo menos 25 por cento de fixação de complemento na diluição 1:4. Compararam-se os resultados obtidos com as 13 partidas de antígeno com aqueles obtidos com a partida com 9 meses de fabricação, usando o teste de chi2 de McNemar e o coeficiente kappa. A grande maioria dos soros apresentou resultados muito próximos quando testados com as diversas partidas de antígeno, e não se observou relação entre tempo de fabricação do antígeno e diferenças nos resultados obtidos.

The complement fixation test is used worldwide in the confirmatory diagnosis of bovine brucellosis. For this technique the antigen is the same as the one used in the tube agglutination test. However, literature is poor in information about the stability of the whole cell Brucella antigen for use in the complement fixation test to establish a time of validity of the antigen. Hence the aim of this investigation was to evaluate the stability of this antigen under refrigeration for use in the complement fixation test. Fourteen batches of antigen prepared with Brucella abortus strain 1119/3, produced from 9 months to 23 years and 11 months before, were analysed. One hundred and sixty-seven cattle sera with varying titres of antibodies to Brucella were tested through the warm complement fixation microtechnique with five 50 percent haemolytic units of complement. Sera with at least 25 percent of complement fixation in dilution 1:4 were considered positive. The results with 13 of the antigen batches were compared with the results obtained with the batch produced 9 months before by the McNemar chi2 test and kappa statistic. The oldest antigen batch gave a higher proportion of sera titres which were exactly the same observed with the 9-month-batch (90.4 percent), and the antigen produced 4 years and 3 months before the test gave de lowest proportion of sera with the same titre of the 9-month-antigen (73.7 percent). The comparison of the results after being classified as positive and negative showed that the highest proportion of agreed results was observed with the antigen produced 21 years and 4 months before (98.8 percent, kappa 0.98). The antigen with the lowest proportion of agreed results was the one produced 3 years and 2 months before (91.6 percent, kappa 0.84). The results of the study show that most sera gave very similar results with all antigen batches evaluated, and that there was no relationship between the period of antigen production...

Evaluación de la reacción en cadena de la polimerasa para el diagnóstico de la brucelosis en un rebaño lechero infectado con Brucellaspp / Assessment of polymerase chain reaction (PCR) to diagnose brucellosis in a Brucella infected herd

Para el diagnóstico de la brucelosis bovina en muestras de sangre y/o leche, se comparó la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con el aislamiento in vitro de Brucella abortus, las pruebas serológicas defijación del complemento (FC) e inmunoenzimáticas de competición (ELISA-C) en suero e indirecto (ELISA-I) en leche. Se analizaron muestras de vacas lecheras de un rebaño infectado “A”, vacunadas con B. abortus cepa 19 antes de los 8 meses de edad y revacunadas con B. abortus cepa RB51 como adultas (n= 99) y de otro “B”, libre de brucelosis (n=100), como control. En A, la PCR identificó 14 vacas infectadas con B. abortus: nueve con cepa silvestre y cinco con cepa silvestre y RB51. No se identificó B. abortus cepa 19. El biotipo 1 se aisló en un caso. Las 14 vacas infectadas con la cepa silvestre resultaron positivas en las tres pruebas serológicas. En B, por PCR no se identificó Brucella. Las pruebas serológicas mostraron una sensibilidad del 100% respecto de PCR. La especificidad para FC, ELISA-C y ELISA-I fue del 100%, 99% y 95%, respectivamente. Se concluye que la PCR sería útil como complemento de las pruebas serológicas o cuando no hay un resultado concluyente.

The diagnosis of bovine brucellosis using PCR in blood and milk samples from two dairy herds were compared to in vitro isolation, complement fixation test (CF), competitive ELISA (C-ELISA) in serum, and indirect ELISA (I-ELISA) in milk. Samples were obtained from 99 cows vaccinated with Brucella abortus strain 19, from a naturally infected herd (A), whose cows were also vaccinated with B. abortus strain RB51 as adults, and 100 from brucellosis free herd (B). In herd A, PCR identified 14 B. abortus infected cows: nine infected with wild type, and five with wild type and RB51, B. abortus S 19 was not identified. B. abortus biotype 1 was isolated from one cow. All cows infected with a wild strain of B. abortus were positive in serologic tests. Brucella was not found in herd B using PCR. Serological test showed 100% sensitivity related to PCR. The specificity for CF, C-ELISA and I-ELISA was 100%, 99% and 95% respectively. PCR could be useful to identify Brucella biotypes and to complement serologic tests.

Brucelose em bovinos com bursite cervical diagnosticada em abatedouro sob inspeçäo federal / Brucelosis in cattle with supraspinous bursitis diagnosed in an abattoir under federal inspection

Estudo epidemiológico tipo caso-controle realizado em Uberlândia, Minas Gerais (MG), Brasil, pesquisou a ocorrência de brucelose em bovinos com bursite cervical, abatidos no período de agosto de 1993 a julho de 1994. O diagnóstico sorológico de brucelose foi realizado mediante a prova de soroaglutinaçäo rápida em placa. Os casos de bursite foram identificados por técnico do Serviço de Inspeçäo Federal (SIF), com base em características morfológicas, previamente padronizadas. Para a determinaçäo da "Razäo de Odds" e do risco atribuível entre bursite e brucelose, utilizaram-se 30 animais com o quadro e, como controle, 90 bovinos sem a patologia. Dos animais com bursite, 13,3 por cento eram brucélicos, contra 5,6 por cento do grupo controle (P=0,115). Dentre aqueles com brucelose e bursite, as bolsas continham fibrina (40,0 por cento) e projeçöes digitiformes (33,3 por cento); apenas nas bursites dos sorologicamente negativos encontraram-se presença de pus, de nódulos e de líquido viscoso. A "Razäo de Odds" encontrada entre brucelose e bursite foi da ordem de 2,61, näo sendo demonstrada associaçäo entre bursite cervical e sorologia positiva para brucelose (P>0,05). No âmbito da Saúde Pública e ocupacional, sugere-se a atençäo de técnicos e profissionais, visando diminuir o risco de infecçäo e evitar contaminaçäo de carcaças, equipamentos e instalaçöes.

Estudo sorológico comparativo da borreliose de lyme, brucelose e leptospirose em bovinos / Comparative serological study of Lyme Borreliosis, Brucelosis and Leptospirosis in cattle

Estudou-se a frequência de soros positivos de bovinos para borreliose de Lyme, brucelose e leptospirose, utilizando-se ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto para detecçäo de anticorpos anti-Borrelia burgdorferi lato sensu, soroaglutinaçäo rápida para Brucella abortus e microaglutinaçäo para Leptospira interrogans. Foram analisadas 376 amostras provenientes de animais de diferentes municípios do Estado do Rio de Janeiro, 100 amostras do monicípio de Bananal (Säo Paulo) e 37 amostras procedentes do município de Alegre (Espírito Santo). Nä houve relaçäo entre os resultados positivos para B. burgdorferi pelo teste ELISA, resultados positivos para L. interrogans pelo teste de soroaglutinaçäo microscópica e resultados positivos pata B. abortus pelo teste de soroaglutinaçäo rápida. A maior porcentagem de animais soropositivos para B. burgdorferi foi observada no grupo proveniente do município de Alegre (Espírito Santo), onde também foram identificados casos humanos com susperita clínica e sorologia positiva (ELISA e Western blotting). A percentagem de soropositivos caracteriza as regiöes estudadas como susperita para presença do agente da borreliose de Lyme.

Diagnostic efficiency of Brucella soluble antigens in immunodiffusion tests and ability to differentiate Brucella abortus strain 19 vaccinated cattle

Foram comparados três antígenos solúveis: um hapteno nativo (NH) de B. melitensis 16M, um polissacarídeo (PS) obtido de B. abortus 1119-3 e outro polissacarídeo de cadeia O (O-Chain) originado também da última Brucella. Os testes de imunodifusão radial (RID) e imunodifusão em gel de ágar (AGID) foram confrontados com as três classes de soros bovinos: a) infectados naturalmente (n = 76), b) não infectados (n = 130) e c) vacinados com B19 (n = 61) reagindo a testes sorológicos clássicos. Foram determinadas a sensibilidade (Se), a especificidade (Sp) e a capacidade para discriminar vacinados (ADV). A Se mais alta (84,3%) no teste RID foi demonstrada pelo antígeno NH, enquanto os três antígenos tiveram 100% de Sp. O antígeno O-Chain teve 100% de ADV nesse teste. O teste AGID com estes antígenos demonstrou 100% Sp e ADV, enquanto o antígeno PS mostrou uma melhor Se (86,6%). Finalmente, por sua qualidade de produção e eficiência, os antígenos PS e NH representam uma alternativa segura e econômica para o diagnóstico suplementar da brucelose.

Uso de las pruebas de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas y aglutinación con rivanol para el diagnóstico de brucelosis bovina en Yucatán, México / Use of an enzyme-linked immunosorbent assay and the rivanol agglutination test for the diagnosis of bovine brucellosis in Yucatan, Mexico

Se usaron sueros negativos de animales vacunados (322) y no vacunados (248) provenientes de hatos libres de brucelosis y sueros positivos (90) a las pruebas de Rosa de Bengala (RB) y fijación de complemento (FC) de hatos infectados con Brucella abortus, para determinar la sensibilidad relativa y la especificidad de las pruebas inmunoenzimática indirecta (I-ELISA) y de aglutinación con rivanol (RIV). La concordancia entre pruebas se determinó mediante el análisis kappa usando 688 sueros. La prueba I-ELISA mostró una sensibilidad del 100 por ciento y especificidad de 92.8 por ciento. La RIV tuvo una sensibilidad de 97.8 por ciento y especificidad de 100 por ciento. La concordancia (Kappa) entre I-ELISA y FC fue de 0.73, entre I-ELISA y RIV de 0.74, entre I-ELISA y RB de 0.79 y entre RIV y FC fue de 0.96. Los valores predictivos (VP); para I-ELISA fueron 66.9 por ciento para positivos y 100 por ciento para negativos y para RIV, 100 por ciento para positivos y 99.7 por ciento para los negativos. La prueba I-ELISA puede ser usada como tamiz en las condiciones de Yucatán o como prueba confirmatoria en lugares donde la vacunación no se lleva a cabo. La prueba de RIV mostró una falta de sensibilidad, por tanto no se recomienda en etapas finales de programas de erradicación, pero podría usarse como prueba confirmatoria en programas de control o etapas tempranas en campañas de erradicación

Bursite cervical em bovinos: avaliaçäo da brucelose como fator de risco / Bovine supraspinous bursitis: brucellosis evaluation as risk factor

Estudo realizado no Frigorífico Triângulo de Uberlândia, Minas Gerais (MG). Estabelece a possível relaçäo entre bursite cervical e brucelose, em bovinos abatidos no período de agosto de 1993 a julho de 1994. O diagnóstico de brucelose foi realizado mediante a prova de soroaglutinaçäo rápida em placa. Para a determinacäo dos odds ratio e do risco atribuível, entre bursite e brucelose, utilizaram-se 30 animais com o quadro e, como controle, 90 bovinos sem a patologia. A freqüência de ocorrência de bursite cervical foi igual a 0,14 por cento (40/28.677). Dos animais com bursite, 13,3 por cento eram brucélicos, contra 5,6 por cento do grupo controle (P=0,115). O odds ratio encontrado entre a brucelose e a bursite foi da ordem de 2,61 (P>0,05). O risco atribuível da patologia na populaçäo estudada foi igual a 7,64 por cento. Mesmo diante da ausência da relaçäo estatística entre bursite e brucelose, esta patologia deve continuar a merecer a atençäo de técnicos e profissionais de frigoríficos, para diminuir eventuais riscos de infecçäo de trabalhadores, bem como de evitar a contaminaçäo de carcaças, equipamentos e instalaçöes

Comparative study in cattle and buffaloes for evaluation of various diagnostic tests for brucellosis.

Serum samples from 1134 vaccinated and non vaccinated animals (775 cattle and 359 buffaloes) were screened with different serological tests like Rose Bengal plate Test (RBPT), plate agglutination test (PAT) and standard tube agglutination test (SAT). The agreement between these three screening tests was 87.19% and 97.86% in vaccinated and non vaccinated cattle while corresponding figures in buffaloes were 91.56% and 84.42%. Among vaccinated animals a positive percentage of 12.8 and 8.8 was noticed in cattle was 4.7 and 6.3, respectively by RBPT. All the positive sera samples were further tested by mercaptoethanol test (MET) and heat inactivation test (HIT) to conform the result of screening tests and to differentiate vaccinal titre from that of active infection. It was concluded that RBPT is overall best screening test to diagnose bovine brucellosis. MET and HIT are good supplementary tests but MET is better than HIT both in cattle and buffaloes. Some high titered non vaccinated buffaloes were negative in RBPT but positive by all other tests.